文章目录

0引言Introduction

1 材料和方法Materials and methods

1.1 设计

1.2 时间及地点

1.3 材料

    1.3.1 实验动物

    1.3.2 主要试剂与仪器

1.4 方法

    1.4.1 动物模型制备及给药

    1.4.2 取材及切片制备

    1.4.3 番红O染色法

    1.4.4 细胞培养及处理

    1.4.5 MTT法检测C28/12细胞增殖

    1.4.6 酶联免疫吸附法检测膝关节组织和细胞中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13水平

    1.4.7 免疫印迹法检测WWP2、Notch受体1、锯齿状Notch配体1和Notch胞内域1蛋白表达水平

    1.4.8 蛋白质免疫共沉淀分析

    1.4.9 泛素化分析

1.5主要观察指标

1.6 统计学分析

2 结果Results

2.1 实验动物数量分析

2.2 黄芪多糖对小鼠骨关节炎的影响

2.3黄芪多糖对白细胞介素1β诱导的C28/12细胞功能的影响

2.4 黄芪多糖调控Notch受体1通路和泛素化对C28/12细胞功能的影响

3 讨论Discussion

文章摘要:背景:黄芪多糖对骨关节炎有确切疗效,但其作用机制还不清楚。目的:探讨黄芪多糖调控包含WW域的E3泛素蛋白连接酶2（WW domain containing E3 ubiquitin protein ligase 2,WWP2）介导的Notch受体1泛素化对骨关节炎的影响。方法:（1）体内实验:30只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪多糖组,每组10只。除假手术组外,构建小鼠骨关节炎模型,黄芪多糖组给予黄芪多糖干预,干预4周后麻醉小鼠取膝关节组织,番红O染色法、国际骨关节炎研究协会评分评估小鼠关节软骨损伤情况。（2）体外实验:采用5μg/L白细胞介素1β培养C28/12细胞24 h建立骨关节炎细胞模型,分为对照组、白细胞介素1β组、50 mg/L黄芪多糖处理组、黄芪多糖联合Notch受体1过表达或WWP2干扰组。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术测凋亡,蛋白质免疫共沉淀实验用于验证WWP2和Notch受体1的结合,泛素化实验分析黄芪多糖对WWP2介导的Notch受体1泛素化水平的影响,酶联免疫吸附法检测小鼠膝关节组织和C28/12细胞中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13水平,免疫印迹法检测小鼠膝关节组织和C28/12细胞中WWP2、Notch受体1、锯齿状Notch配体1和Notch胞内域1蛋白的表达。结果与结论:（1）体内实验结果证实,黄芪多糖干预缓解了小鼠软骨损伤,抑制了膝关节组织基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13水平,增加了蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达水平;（2）体外实验结果证实,黄芪多糖干预促进了细胞增殖、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原及WWP2的表达,抑制了细胞凋亡、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13水平、Notch受体1、锯齿状Notch配体1和Notch胞内域1蛋白的表达,Notch受体1过表达和WWP2干扰逆转了黄芪多糖的作用;（3）黄芪多糖促进了WWP2介导的Notch受体1的泛素化水平;（4）结果表明,黄芪多糖通过提高WWP2介导的Notch受体1泛素化水平,抑制Notch信号通路,对小鼠骨关节炎起到一定的治疗作用。

文章关键词:

论文分类号:R285.5